AGR2蛋白生物学功能和机制的初步研究

【摘要】AGR2(anteriorgradient-2)是一种分泌蛋白,广泛存在于肺、乳腺、前列腺、胰腺和结肠等腺体组织,并在这些腺体的肿瘤组织中过量表达,与肿瘤细胞的存活、生长和转移相关。AGR2的表达与乳腺癌、前列腺癌、胰腺癌等癌症的发生发展和预后相关,被认为是一个很有前途的早期诊断和判定预后的标志物。已有的研究主要集中于AGR2在相关肿瘤中的作用,观察肿瘤细胞系过表达或敲除AGR2之后,对其生长、迁移等的影响；然而AGR2作为一个分泌蛋白,究竟是如何作用于靶细胞,相关的信号通路等信息知之甚少。本研究中,我们首先利用原核表达纯化技术得到高浓度无标记的AGR2蛋白,然后用它去处理乳腺癌细胞系MCF7；实时细胞分析仪监测发现,在AGR2处理后的20分钟就能观察到信号的升高,而一些细胞质蛋白激酶的抑制剂可以特异性的阻止这些信号的产生；利用WesternBloting也检测到了AGR2刺激的P38、AKT的活化；这些结果表明,我们纯化的AGR2能够作为分泌蛋白,迅速激活靶细胞内的信号。为了深入了解其作用机理,我们用AGR2蛋白处理MCF7细胞,然后利用基因表达谱芯片分析其靶基因的表达,并结合生物信息学方法,分析AGR2调控可能涉及的信号通路。AGR2刺激细胞12小时后,能够调控大量基因的表达,对其中20个差异基因的表达进行Q-RT-PCR验证,证实了VEGFA、VLDLR、FZD10、CCL2、AXIN2等基因表达被上调或下调；通过GO分析、Pathway分析和聚类分析,发现分泌蛋白AGR2蛋白可能通过mTOR等信号通路发挥作用。本研究证明AGR2作为分泌蛋白可以快速激活靶细胞内的信号,并通过靶基因表达谱分析,初步探讨了其作用机制,为后续的详细研究奠定了基础；研究结果对于了解相关肿瘤发生发展的分子机制,以及在临床上开展以AGR2为分子靶点的个体化诊疗、预后判断等具有重要参考意义。
【作者】魏龙刚；
【导师】吕忠显；
【作者基本信息】厦门大学，化学生物学，2014，硕士
【关键词】AGR2；RTCA；基因表达谱芯片；

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